ПЦР диагностика ВПЧ. Что это такое?

 Полимеразно-цепная реакция – современный и очень точный метод диагностики, который позволяет выявить в организме ДНК возбудителей различных болезней путем многократного увеличения концентрации отдельных участков ДНК в полученном биоматериале. ПЦР сегодня широко применяется в гинекологии и урологии для выявления заражения папилломавирусом и определения его типа. Как действует этот метод, и зачем нужна ПЦР диагностика ВПЧ, рассмотрим в статье.

Цели выявления папилломавируса

ВПЧ – это большая группа ДНК-содержащих вирусов, поражающих эпителиальные ткани человека, преимущественно кожу и слизистые оболочки. После заражения ВПЧ у человека могут появиться новообразования, состоящие из разросшихся эпителиальных клеток (бородавки, папилломы, кондиломы). Это очень неприятные, но относительно безопасные для общего здоровья результаты деятельности вируса.

Однако ученые по мере изучения ВПЧ выявили типы, несущие высокий онкогенный риск. Эти группы штаммов приводят к появлению неоплазии эпителиальных тканей половых органов у женщин, что со временем (примерно через 10-15 лет после заражения) может закончиться появлением раковой опухоли.

На сегодняшний день онкогенность доказана для следующих типов: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 59, 68 и некоторых других. Из них 16 и 18 типы чаще всего вызывают неопластические изменения шейки матки.

Важно!

 Неоплазия шейки матки и рак на первых стадиях никак себя не проявляют. Только ежегодный осмотр гинеколога и своевременная сдача назначенных анализов даст уверенность в том, что со здоровьем все в порядке.

По данным ВОЗ во всем мире ежегодно для 250 тыс. женщин борьба с раком ШМ оканчивается смертью. При этом примерно у 99% больных аденокарциномой (один из видов онкологии) женщин в организме обнаруживается тип ВПЧ высокого онкогенного риска. Сдавать представительнице прекрасного пола соскоб из цервикального канала на ВПЧ рекомендуется после достижения 25 лет минимум раз в три года.

После того как была выяснена роль папилломавируса в развитии онкологических заболеваний, ранней диагностике стали придавать большое значение. Сегодня на каждом профилактическом осмотре врач-гинеколог проводит цитологический скрининг.

При обнаружении нетипично измененных клеток, даже если визуально шейка матки в норме, женщине предлагается сдать анализ ПЦР на ВПЧ. При выявлении специфически измененных клеток и папилломавируса назначается лечение и регулярное наблюдение.

Специфика ПЦР анализа на ВПЧ

ПЦР-анализ был придуман в самом начале 80-х годов прошлого века. Его создал биохимик из США Кэри Муллис, реализовав идею, предложенную норвежским ученым Хьеллем Клеппе. За изобретенный метод Муллис получил Нобелевскую премию.

Суть метода ПЦР в том, чтобы удвоить кусочки нуклеотидной цепочки с использованием специального фермента (ДНК-полимеразы) в условиях лаборатории (то есть in vitro), а затем повторить эту операцию много раз. Для этого используется специальный прибор-амплификатор. При этом копируется только изначально заданный участок (применяется ДНК-матрица и специальные праймеры). Если такого участка в биоматериале нет, то и амплификации не произойдет.

Именно это обеспечивает ПЦР анализу очень высокую точность. Если все сделано правильно, результат получится 100% достоверным.

Метод ПЦР используется:

• для выявления возбудителей инфекционных заболеваний различного характера и уточнения диагноза;
• для установления личности и родственных связей (отцовства и т. д.);
• для сравнения биологических образцов в криминалистике;
• для научных исследований (медицинских, биологических, генетических, фармакологических).

 Метод полимеразной цепной реакции для диагностики хорош тем, что дает точный результат, при этом биоматериала для него нужно совсем немного. Это упрощает саму процедуру его забора. Для разных типов ПЦР-анализов используют соскоб с внутренней стороны щеки, капельку спермы, мочи, крови и т. п.

Вирус папилломы человека тропен к эпителиальным тканям и локализуется всегда в месте попадания в организм. Поэтому для ПЦР диагностики ВПЧ берут мазок (соскоб) у женщин из цервикального канал, а у мужчин – из уретры. В крови ДНК вируса практически не обнаруживается, так что она для анализа не подходит.

Обработка полученного материала в амплификаторе и обработка результатов занимает 1-2 дня.

Показания к исследованию

ПЦР-анализ может быть назначен в рамках скринингового обследования, для постановки точного диагноза или отслеживания результатов лечения.

Основные показания:

1. Плановый ежегодный гинекологический осмотр и обследование женщины через 3 года после начала половой жизни со взятием цитологического мазка и осмотром шейки матки в зеркалах;
2. Выявленная визуально неоплазия ШМ или новообразования в аногенитальной области (кондиломы). Последний пункт касается и женщин и мужчин;
3. Комплексный анализ ПЦР-6 или ПЦР-12 на выявление половых инфекций (хламидиоза, цитомегаловируса, герпеса, папилломавируса, микоплазмоза, уреаплазмоза, гарднереллеза и т. д.) в рамках подготовки к беременности или скрининга;
4. Выявленные в цитологическом мазке измененные клетки эпителия без визуально определяемой неоплазии;
5. Контрольные анализы после лечения неоплазии ШМ III степени или выявления штаммов вируса высокого канцерогенного риска.

Правила и условия подготовки

Чтобы получить достоверный результат ПЦР анализа, нужно правильно выполнить забор биоматериала. Для женщин актуальны такие моменты:

1. Перед сдачей анализа за три дня прекратить половые контакты, не делать спринцевание, исключить процедуру УЗИ, проводимую интравагинально, или кольпоскопию;
2. За две недели – закончить прием антибактериальных препаратов, использование суппозиториев, свечей, шариков и других лечебно-профилактических и контрацептивных средств;
3. Сдавать анализ через 5-8 дней после окончания менструации;
4. Утром перед исследованием не проводить гигиенических процедур с использованием гелей, мыла (последний раз – накануне вечером).

Что касается мужчин, перед мазком из уретры им рекомендуется не мочиться минимум 2 часа, за сутки не мыть половой член с использованием антибактериального мыла, геля.

Забор биоматериала и чистота анализа

Каждый, кто получает бланк с результатом анализа ПЦР, увидит там одну строчку – КВМ (контроль взятия материала). Расшифровка этой строки проста: если в ней стоит цифра 4 или больше – это значит, что забор выполнен правильно, и в материале содержится не менее 10 000 копий человеческого ДНК (то есть 10 в 4 степени или 4 lg).

Если цифра меньше 4, результат может быть недостоверен из-за того, что в анализе оказалась преимущественно слизь, а клеток эпителия слишком мало для амплификации. Таким образом, клиники подстраховываются и указывают, что анализ лучше пересдать.

Испортить результат может также попадание посторонних веществ в соскоб или нарушение стерильности. Квалифицированный специалист обязательно предварительно обработает шейку матки (головку полового члена и отверстие уретры у мужчины, соответственно) физиологическим раствором. Специальный зонд он введет в цервикальный канал (уретру) и будет аккуратно вращать не менее 3 секунд для получения нужного количества клеток.

Сразу же после аккуратного извлечения (у женщины важно не задеть стенки влагалища) специалист поместит зонд в пробирку с жидкостью, и 10-15 секунд будет поворачивать его вокруг оси, осторожно прижимая к стенкам, затем вынет и плотно закупорит пробирку.

Виды анализов с применением полимеразно-цепной реакции на ВПЧ

Анализ ПЦР на ВПЧ это не одна методика, а несколько. В зависимости от поставленных целей выбирается объем диагностического исследования для выявления папилломавирусной инфекции. Каким он должен быть, решает врач.

Качественный анализ

Эта методика используется преимущественно в комплексных анализах, которые рекомендуется сдавать женщине в качестве скрининга (ПЦР-6 или ПЦР-12). Например, это делается при подготовке к беременности или во время нее. Если половые инфекции, протекающие без выраженной симптоматики, вовремя будут пролечены, это предотвратит развитие многих осложнений и сделает условия развития плода более благоприятными.

Важно!

 Заражение будущей мамы 11 и 6 типом вируса при неблагоприятном стечении обстоятельств может привести к формированию врожденного папилломатоза, поражающего верхние дыхательные пути ребенка.

При проведении качественного анализа проводится амплификация ВПЧ ВКР (высокого онкогенного риска) без выделения определенного типа. Комплексно оценивается присутствие штаммов 14-21. Результат качественного анализа бывает либо положительным, либо отрицательным («обнаружен»/«не обнаружен»).

Объем исследования может быть разным, от количества выявляемых штаммов зависит и его стоимость. Например, анализ на 2 самых опасных типа ВПЧ (16 и 18) обойдется примерно в 1000 р., а качественный анализ 14 типов – в 1300, поскольку цена выполнения соскоба не меняется. Поэтому более объемные анализы сдавать выгоднее.

Если анализ положительный, то его результаты можно расширить, выполнив генотипирование.

Качественный анализ с типированием

Генотипирование – это обнаружение в материале ДНК определенного типа ВПЧ. Такой анализ позволяет выяснить степень опасности инфекции для женщины. Если заражение вызвано 16 или 18 типом, чаще всего провоцирующим неоплазии ШМ, пациентке рекомендуется выполнить кольпоскопию, чтобы детально рассмотреть цервикальный канал на предмет неоплазии, и затем наблюдать за ее состоянием в динамике.

Типирование применяется и для контроля, чтобы выяснить, исчез ли выявленный ранее тип ВПЧ из организма. Если в контрольных анализах получены другие штаммы, значит, лечение помогло, а обнаруженные вирусы – результат нового инфицирования.

При проведении типирования в бланке анализа будет несколько строчек, и для каждой свой ответ – обнаружен данный тип или нет.

Цена исследования тоже зависит от объема. В среднем дифференциальный анализ 21 типа ВПЧ стоит около 3000 р.

Количественный анализ

Позволяет выяснить количество вирусной ДНК, что тоже дает возможность спрогнозировать риск развития неоплазии. В результате анализа указывается степень вирусной нагрузки:

1. Lg меньше 3 – нагрузка невелика, вирус размножается неактивно и, скорее всего, организм подавит инфекцию сам;
2. Lg больше 3, но меньше 5 – требуется дальнейшее исследование (кольпоскопия), скорее всего, вирус уже видоизменяет ткани;
3. Lg больше 5 – наибольший риск, такие результаты характерны для выраженной неоплазии, что требует хирургического и противовирусного лечения.

Количественный анализ и типирование могут проводиться вместе, тогда для каждого типа будет указано его присутствие и количество.

Если вирусная нагрузка в контрольном анализе через полгода снизилась до минимальной, значит, инфекция была транзиторной и организм подавил ее. Неизменно высокий показатель означает, что инфекция персистирующая и требует лечения. Если нагрузка повысилась по сравнению с предыдущим результатом, то это расценивается как рецидив инфекции.

Видео в тему

Частые вопросы

Как работает ПЦР диагностика ВПЧ?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) диагностика ВПЧ (вирус папилломы человека) позволяет определить наличие и тип ВПЧ в организме путем увеличения количества вирусной ДНК до уровня, пригодного для обнаружения.

Какие типы ВПЧ могут быть обнаружены с помощью ПЦР диагностики?

ПЦР диагностика ВПЧ позволяет обнаружить как высокоонкогенные типы ВПЧ (которые могут вызвать рак шейки матки, вульвы, влагалища, ануса, горла), так и низкоонкогенные типы (которые могут вызвать бородавки и папилломы).

Какова эффективность ПЦР диагностики ВПЧ?

ПЦР диагностика ВПЧ является очень чувствительным методом и позволяет обнаружить даже небольшие количества вирусной ДНК, что делает его эффективным инструментом для раннего выявления инфекции ВПЧ.

Полезные советы

СОВЕТ №1

ПЦР (полимеразная цепная реакция) диагностика ВПЧ (вирус папилломы человека) – это метод определения наличия и типа ВПЧ в организме путем увеличения количества вирусной ДНК до уровня, пригодного для анализа.

СОВЕТ №2

ПЦР диагностика ВПЧ позволяет выявить высокоонкогенные типы вируса, которые могут привести к развитию рака шейки матки, а также определить низкоонкогенные типы, которые могут вызвать появление бородавок и папиллом.